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口蹄疫A型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法) 使用說明書

更新時間:2023-05-16      瀏覽次數:571

口蹄疫A型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)

使用說明書

【產品名稱】

通用名:口蹄疫A型抗體檢測試劑盒(酶聯免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A(ELISA)

【包裝規格】×2/盒96T×1/盒、96T、96T×5/盒

【預期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發生水泡和爛斑

本試劑用于檢測牛、羊、豬血清中口蹄疫A型抗體,可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果評價

【原    理】

    本試劑盒由預包被口蹄疫A型抗體的酶標板、抗體工作液、抗原液、酶標記物及其他配套試劑組成,應用阻斷酶聯免疫法(ELISA)原理檢測牛、羊、豬血清樣本中口蹄疫A型抗體。實驗時將稀釋的樣本與抗原液同時加入酶標板中孵育,樣本中的抗體與酶標板上的抗體競爭抗原,阻斷抗原與板的結合;經洗滌后,再加抗體工作液孵育;經洗滌后加入酶標記物孵育;再經洗滌除去未結合的酶標記物,在孔中加底物液,與酶標結合物反應形成藍色產物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關;加入終止液終止反應后,產物變為黃色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有口蹄疫A型抗體。

【試劑盒組成】

序號

名稱

規格/96T×1

規格/96T×2

規格/96T×5

1

酶標記物

6ml×1(紅蓋)

11ml×1(紅蓋)

26ml×1(紅蓋)

2

抗體工作液

6ml×1(藍蓋)

11ml×1(藍蓋)

26ml×1(藍蓋)

3

抗原液

6ml×1(黑蓋)

11ml×1(黑蓋)

26ml×1(黑蓋)

4

20X濃縮洗滌液

40ml×1(白蓋)

40ml×2(白蓋)

200ml×1(白蓋)

5

底物液A

6ml×1(白蓋)

11ml×1(白蓋)

26ml×1(白蓋)

6

底物液B

6ml×1(黑蓋)

11ml×1(棕蓋)

26ml×1(黑蓋)

7

終止液

6ml×1(黃蓋)

11ml×1(黃蓋)

26ml×1(黃蓋)

8

陽性對照

1.0 ml×1(紅蓋)

1.5 ml×1(紅蓋)

2.0 ml×1(紅蓋)

9

陰性對照

1.0 ml×1(綠蓋)

1.5 ml×1(綠蓋)

2.0 ml×1(綠蓋)

10

酶標板

96T×1

96T×2

96T×5

11

蓋板膜

1

2

5

12

自封袋

1

1

2

13

說明書

1

1

1

14

稀釋板

1

2

5

 

【儲存及有效期】 2~8℃保存,有效期12個月。

包被板開封后請于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 450nm、630nm波長的酶標儀,37℃恒溫設備,可調微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品1周內可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。

2.用工作洗滌液將待檢牛、羊先按32倍稀釋(如l血清加入155μl工作洗滌液中,混勻),待檢豬血清按16倍稀釋(如l血清加入75μl洗滌液中,混勻),陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條,設陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl,樣品孔每孔先加入工作洗滌液25ul,再加入稀釋后的樣品25μl;最后都加入抗原液50μl。

  注:加入抗原后牛、羊樣本稀釋比例相當于1:128,豬樣本稀釋比例相當于1:64。

4.震蕩混勻10秒,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水浴)避光反應30分鐘。

5.甩去孔內液體,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干。

6.每孔加抗體工作液50μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌,同步驟5。

8.每孔加酶標記物50μl,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應30分鐘。

9.洗滌,同步驟5。

10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應15分鐘。

11.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。

【參考值】 實驗正常的情況下,陰性對照A值≥1.0,陽性對照A值≤陰性對照A值×50%。

【檢驗結果的解釋】

1.PI(阻斷率)=(1- 陰性對照平均A值(樣本A值)×100%,PI≥50%為陽性;PI<50%為陰性。

2.本實驗檢測牛、羊血清結果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫A型抗體,且效價高于1:128,達到保護水平;反之檢測結果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫A型抗體,或效價低于1:128,未達到充足保護水平。

3.本實驗檢測豬血清結果為陽性時表明待檢樣本中含有口蹄疫A型抗體,且效價高于1:64,達到保護水平;反之檢測結果為陰性時表明待檢樣本中不含有口蹄疫A型抗體,或效價低于1:64,未達到充足保護水平。

4.如需了解樣本抗體的最終效價,可將樣本進行梯度稀釋,使PI50%的最高稀釋比例即為該樣本抗體的最終效價。

【試驗方法的局限性】

該試驗僅作為定性牛、羊、豬血清中口蹄疫A型抗體,根據PI值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。

該試劑盒不適用于合成肽疫苗免疫抗體效價評估


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